J Exp Med：依赖型单核苷酸转移酶（NNT）通过维持Fe-S蛋白功能而调节NSCLC线粒体代谢

生物心肌梗塞发挥显露弱小而繁杂的细胞表皮核葡萄糖，不太可能是由胃有组织的高氧官能产生的。由于代谢(ROS)的主导作用于是这种葡萄糖的副衍生物，因此相当需要以烟乙酰甘氨酸二核苷酸磷酸(NADPH)的形式来降低新陈葡萄糖，以考虑到这种细胞表皮核活官能的减慢。烟乙酰单核苷酸转移复合物(NNT)可通过NADPH的主导作用于来保持细胞表皮核的水溶官能灵活官能，但其在非小细胞表皮心肌梗塞(NSCLC)之中的主导作用仍未确切。本研究者找到NNT的隐含在心肌梗塞动物假设假设之中微小减慢了甲状腺的演化成和侵袭官能。另除此以外，全面性研究者找到NNT缺少就会引致细胞表皮核该系统障碍，这与新陈葡萄糖的大量进一步提高相关联，而是以铁硫细胞的活官能降低为徽章。这些瑕疵与NADPH的前提和ROS的获取有关，这声称NNT在大大降低这些关键因素细胞糖类的分解之中起着关键因素主导作用。

比对方法

许多相似的心肌梗塞动物假设假设是运用C57BL6/J动物假设的饲养作法而创建。有趣的是，这些动物假设携带纯合除此以外显子7-11的上面缺少以及细胞表皮核之中Nnt基因序列的错义甲基化引致非该系统细胞的隐含。因此，可以运用这种自然缺少的等位基因(NntΔex7-11)来赞誉NNT对心肌梗塞频发的因素。

首先，采用Kras甲基化(LSL-KrasG12D/+)招致的心肌梗塞假设来检验Nnt隐含对心肌梗塞频发的因素。携带Cre合并复合物的腺病毒HIVLSL-KrasG12D/+动物假设，可抑止KrasG12D在胃上皮之中的隐含和胃膀胱癌的演化成。运用LSL-KrasG12D/+动物假设和C57BL6/J动物假设繁殖产生Nnt+/+隐含动物假设或NntΔex7-11/Δex7-11隐含动物假设(布1A-1B)。该假设之中Nnt的隐含引致Cre合并复合物诱发甲状腺的耗损加快3个月(布1C-1D)。然后，运用Kras甲基化与p53缺少同时隐含(LSL-KrasG12D/+；Trp53flox/flox，也专指KP)创建心肌梗塞假设。Nnt的隐含从未转变Cre抑止的KP动物假设的%-(布1E)。有趣的是，在这个假设之中，p53的缺少抑止了Nnt隐含对心肌梗塞演化成的因素，并且无论Nnt隐含如何，实验最终都仰赖于微小的甲状腺耗损(布1F)。心肌梗塞耗损%-的量化在不同性状动物假设之间从未关联官能(布1G-1H)。

虽然不同性状动物假设之间的甲状腺耗损从未关联官能，但确实判读到假设之中甲状腺侵袭官能的关联官能。我们找到Nnt+/+动物假设之中51.3%的甲状腺为3级(膀胱癌)或以上，而NntΔex7-11 / +和NntΔex7-11 /Δex7-11动物假设之中均36.5%和38.8%的甲状腺是高级(布1I)。Nnt+/+动物假设频发4级甲状腺的基频特别是在进一步提高，确实了甲状腺侵袭官能的变化(布1J)。总之，这些样本声称Nnt促使了心肌梗塞的频发和侵袭。

2 NNT的缺少不因素细胞表皮核之中硫氧还细胞(TXN)的水溶官能体系

为了全面性检验NNT对心肌梗塞生物学的因素，首先检验shRNA抑制NNT细胞的隐含，包括4个隐含NNT细胞的NSCLC细胞表皮系 (A549, H1299，H2009和PC9)和不隐含NNT细胞的H441细胞表皮(布2A)。抑制NNT细胞隐含抑制NSCLC细胞表皮的增殖灵活官能(布2B)。并且找到慢病毒HIV4紧接著NNT的下调降低了H2009和PC9细胞表皮的生存灵活官能(布2C)。此除此以外，H441细胞表皮的增殖不受NNT的因素。

通常认为NNT有助于NADPH的羧酸亚胺灵活官能，从而保持细胞表皮核细胞水溶官能该系统所处羧酸亚胺情况下(布2D)。抑制NNT降低了H1299、H2009和PC9细胞表皮之中NADPH: NADP+的%- (布2E)。慢病毒HIV4紧接著细胞表皮核之中H2O2特别是在进一步提高(布2F)，所以NNT对H2O2良药现实生活很最重要。

为了确切这些细胞表皮核ROS的进一步提高应该与细胞表皮核水溶官能该系统有关，于是运用Western blotting检验细胞表皮核之中过分解物细胞3(PRDX3)的分解情况下。H2O2通过PRDX3良药，即一对半胱氨酸交联抑止PRDX3演化成阴离子，并且必须通过TXN羧酸亚胺这些半胱氨酸交联才能羧酸亚胺PRDX3的水溶官能该系统。PRDX3阴离子的获取是PRDX3分解的徽章，是细胞表皮核新陈葡萄糖的常以遥相呼应。

奥柳斯芬是一种TXN羧酸亚胺复合物(TRXR)抑制剂，虽然奥柳斯芬的治疗就会引致PRDX3细胞大量分解，但NNT的缺少并从未进一步提高PRDX3的分解(布2G)。此除此以外，NNT的缺少也从未降低细胞表皮核TXN2或TRXR2的细胞高度。总之，这些结果声称NNT在NSCLC细胞表皮增殖灵活官能上发挥最重要主导作用，但NNT活官能的夺去相当就会妨碍细胞表皮核TXN水溶官能该系统，也不就会招致微小的新陈葡萄糖。

3 NNT的缺少就会妨碍细胞表皮核的分解灵活官能

鉴于NNT在IMM之中的聚焦及其因素表皮上中子总能量和羧酸亚胺灵活官能，于是试布探讨NNT对细胞表皮核分解葡萄糖应该最重要。首先，采用鲸鱼细胞表皮除此以外总能量比对仪进行时细胞表皮核阻碍测试，检验NNT缺少对一般细胞表皮核分解该系统的因素。结果找到NNT缺少细胞表皮的耗氧量(OCR) 随细胞表皮核抑制剂的依次传递信息而被降低(布3A)。除此以外的是，NNT缺少细胞表皮的最大排尿灵活官能在不仰赖于非耦合排尿的只能特别是在降低(布3B)。这提示细胞表皮核分解瑕疵与NNT对中子梯度的因素相关联。鉴于NNT缺少微小因素排尿灵活官能，于是检验NNT缺少的H441细胞表皮应该比NNT隐含细胞表皮具备来得少的分解和来得强的丙酮酸灵活官能。这说明了这些细胞表皮在从未NNT的只能不太可能通过细胞表皮核NADPH缺少而保持细胞表皮核的该系统。

细胞表皮核的分解葡萄糖仰赖于ETC的该系统，ETC由内源官能真核细胞的Fe-S细胞复合物组成。考虑到Fe-S细胞复合物的多肽现实生活相当需要NADPH，于是研究者NNT抑制后细胞表皮核排尿该系统的上升应该与Fe-S细胞之除此以外。细胞表皮核阻碍测试可以对排尿该系统进行时一般官能的比对，但不可以对单个ETC复合物所含进行时检验。因此，笔记进行时了来得为专业的实验来比对Fe-S细胞仰赖的排尿之除此以外复合物(I, II, III)。结果找到，基于复合物I(糖异生和氨基)的摄入量，在NNT抑制后复合物I-III的活官能特别是在降低(布3C)。此除此以外，NNT瑕疵细胞表皮微小降低了柠檬酸的OCR，声称降低了柠檬酸半乳糖(SDH)活官能和复合物II-III每秒钟(布3D)。引致这一现象的最重要或许是SDH在ETC和TCA反向之中充当双重主人公。

除了通过ETC保持电子每秒钟除此以外，Fe-S细胞还保持对分解葡萄糖至关最重要的其他细胞复合物的该系统。为了确切NNT应该加入其他Fe-S细胞的该系统，笔记检验了TCA反向之中Fe-S细胞——顺乌头酸复合物(ACO2)的活官能。结果找到抑制NNT特别是在降低了NSCLC细胞表皮系之中ACO2的活官能(布3E)。ACO2活官能的降低不太可能就会损坏TCA反向，进而降低飞轮ETC每秒钟的羧酸亚胺官能颗粒的主导作用于。为了必要非小细胞表皮心肌梗塞之中ACO2该系统的比对，于是赞誉Nnt隐含对KP心肌梗塞之中ACO2活官能的因素。结果声称，Nnt+/+动物假设甲状腺之中Aco2活官能微小高于NntΔex7-11/+ 和NntΔex7-11/Δex7-11之中的，缺失Nnt的甲状腺发挥显露最低的活官能(布3F)。

4 特罗斯季亚涅齐官能NADPH在NNT缺少后保持Fe-S细胞该系统

为了确切与抑制NNT之除此以外的细胞表皮核Fe-S细胞该系统的降低应该与NADPH:NADP+的降低有关，我们试布获取一种细胞表皮核NADPH的特罗斯季亚涅齐官能缺少。为了实现这一目标，我们相当需要了酵母细胞表皮核之中NADH激复合物pos5p，它可以磷酸化NADH而产生NADPH。虽然pos5p以前在细菌之中也有特罗斯季亚涅齐隐含，但据我们所知，pos5p还从未被替换成哺乳动物该系统。为了检验我们应该都能有效地在生物NSCLC细胞表皮的细胞表皮核之中隐含pos5p细胞，我们对酵母细胞进行时了修饰，使其包含HA-tag。Western blot结果显示，在H1299、H2009和PC9细胞表皮的细胞表皮核之中成功隐含了HA-tag标记的pos5p细胞(布4A)。相当需要这些细胞表皮系是为了检验pos5p修复和NNT缺少之除此以外的Fe-S细胞瑕疵的灵活官能，找到抑制NNT后对它们产生很严重的因素。

pos5p的隐含挽回了细胞表皮之中抑制NNT后招致的NADPH: NADP+%-的降低(布4B)。这与隐含pos5p细胞表皮之中pos5p被抑制后排尿双链繁杂社区活动的降低有关(布4C和4D)。此除此以外，pos5p的隐含仅仅挽回了NNT抑制后ACO2活官能的上升(布4E)。总之，这些样本声称保持NNT隐含缺少时NADPH的高度可以保障NSCLC细胞表皮之中Fe-S细胞的该系统。

5 NNT的缺少不就会损坏Fe-S细胞的多肽

考虑到细胞表皮核特罗斯季亚涅齐官能NADPH都能移向NNT缺少之除此以外Fe-S细胞的瑕疵，并且NADPH是高效保持Fe-S细胞多肽的必备条件，因此我们整整试布确切NNT活官能应该保持这一现实生活。Fe-S细胞多肽频发在一个由半胱氨酸脱硫复合物(NFS1)和Fe-S支架细胞(ISCU)组成的多细胞复合物之中。复合物之中任何一种所含的缺少都就会因素多肽，并且也与细胞表皮核瑕疵之除此以外。因此，我们抑制NFS1或ISCU隐含来研究者损坏Fe-S细胞多肽后对排尿双链和ACO2的因素。

在H2009细胞表皮之中，抑制NFS1后特别是在降低糖异生/氨基亚胺和柠檬酸亚胺之中排尿双链复合物I-III的活官能，而在PC9细胞表皮之中只有复合物II-III活官能被微小降低(布5A和5B)。另除此以外，两个细胞表皮系之中，在糖异生/氨基和柠檬酸的主导作用下，抑制ISCU隐含后特别是在移向了OCR(布5A和5B)。并且抑制NFS1或ISCU后特别是在降低了细胞表皮系之中ACO2活官能(布5C)。有趣的是，NNT抑制后所招致的瑕疵与Fe-S细胞多肽所需颗粒产生的瑕疵是同等最重要的(布5A-5C)。

为了确实Fe-S细胞瑕疵对NSCLC细胞表皮的细胞表皮核葡萄糖有该系统官能因素，我们对抑制NNT或ISCU细胞表皮进行时基于液相小分子-高分辨铯(LC-HRMS)的葡萄糖组学研究者。 对这些细胞表皮TCA反向的葡萄糖物进行时比对，结果显示大多数之中间衍生物的丰度频发了特别是在变化(布5D)。这些都声称了分解葡萄糖的严重损坏和Fe-S细胞该系统瑕疵的一致官能。具体地说就是抑制NNT和ISCU隐含后，糖异生、氨基和富马酸被短时间内。NNT缺少细胞表皮之中的柠檬酸高度被枯竭，但抑制ISCU细胞表皮之中并从未此结果。另除此以外，抑制ISCU细胞表皮之中柠檬酸大量获取，而在NNT缺少细胞表皮之中则不仰赖于此现象(布5D)。

除了Fe-S细胞ACO2和SDH除此以外，TCA反向还仰赖于另一种细胞表皮核Fe-S细胞——硫辛酸羧酸复合物(LIAS)的该系统。LIAS对于硫辛酸的羧酸以及最重要硫辛酸长芦基团的共轭都非常关键因素，硫辛酸长芦基团由PDH (E2)和α-酮戊二酸半乳糖(二氢硫辛乙酰S-钻石酰转移复合物，DLST)组成。LIAS对Fe-S细胞多肽的损坏除此以除此以外引人注意，因为其Fe-S簇在羧酸现实生活之中被短时间内掉，这就敦促急剧地进行时细胞互换。事实上，抑制NFS1和ISCU隐含就会大量降低PC9细胞表皮之中PDH-E2和DLST的脂化，然而抑制NNT对细胞脂化无因素(布5E)。总的来说，这些样本声称，NNT招致复合物和葡萄糖瑕疵，它们的瑕疵与Fe-S细胞多肽的损坏之除此以外，但NNT不不太可能直接因素这一现实生活。这反映显露抑制NNT和ISCU后对TCA反向产生相近但又不同的因素。

6 NNT的缺少损坏甘油葡萄糖

除了短时间内TCA反向之亚胺除此以外，NNT瑕疵细胞表皮的LC-HRMS葡萄糖组学比对声称甘油葡萄糖心理因素。抑制NNT促使长双链脂肪芳基谷氨酸的大量获取，而长双链脂肪芳基谷氨酸是甘油β-分解的质子化(布6A)。鉴于在NNT瑕疵细胞表皮之中仰赖于排尿该系统瑕疵，我们推测这些芳基谷氨酸的进一步提高是由于甘油分解降低。我们找到在H1299和PC9细胞表皮之中OCR与棕榈树酸长芦的分解有关，抑制NNT后OCR降低(布6B)。我们还判读到NNT瑕疵细胞表皮之中饱和甘油和不饱和甘油均大量获取(布6C)。甘油羧酸相当需要短时间内大量NADPH，而且NNT抑制后NADPH的前提降低，于是我们认为这些甘油高度的进一步提高是由于特罗斯季亚涅齐官能甘油摄入量的进一步提高。另除此以外，我们找到，NNT瑕疵细胞表皮减慢了对电子显微镜棕榈树酸相近物的吸收灵活官能(布6D)。为了赞誉NNT抑制后甘油的获取应该是一个潜在的不利因素，我们采用饱和甘油棕榈树酸酯刺激NNT瑕疵细胞表皮24小时，找到NNT抑制后使H1299和H2009细胞表皮对棕榈树酸长芦引人注意(布6E)。此除此以外，NNT抑制后特别是在进一步提高了H1299和PC9细胞表皮对一般来说不饱和甘油油酸长芦的持久官能(布6F)。鉴于特罗斯季亚涅齐官能甘油必要的有害物质因素，我们预计细胞表皮除此以外细胞内短时间内将保障NNT的缺少。令人惊讶的是，培养基之中的细胞内短时间内加深了NNT的下调(布6G)。来得最重要的是，NNT抑制后细胞表皮除此以外细胞内缺少就会进一步提高NADPH的短时间内(布6H)，这声称在缺失特罗斯季亚涅齐官能甘油的只能被迫羧酸甘油，使NNT瑕疵细胞表皮之中NADPH的前提降低。总的来说，这些样本声称NNT不太可能在调节甘油葡萄糖之中起最重要主导作用，NSCLC细胞表皮的甘油葡萄糖紊乱不太可能是一个可运用的弱点。

7 NNT缺少后细胞表皮核靶向过分解氢复合物(MitoCatalase)挽回Fe-S细胞该系统

Fe-S细胞对分子氧和来得多有害物质颗粒的分解非常引人注意。虽然我们从未判读到细胞表皮核细胞水溶官能该系统的分解情况下频发变化，但这相当排除NNT抑制后招致的细胞表皮核ROS足够将这些持久官能糖类分解。为了阐明这种不太不太可能，我们采用了细胞表皮核靶向的过分解氢复合物(MitoCatalase)来减慢细胞表皮核的水溶官能灵活官能。我们成功地在H1299、H2009和PC9细胞表皮之中过隐含了MitoCatalase (布7A)。MitoCatalase的隐含也部分移向了NNT抑制后之除此以外细胞表皮核之中H2O2的产生(布7B)。这与NNT抑制后排尿双链繁杂社区活动的降低比较应(布7C和7D)。另除此以外，MitoCatalase的隐含恢复NNT抑制后ACO2的活官能(布7E)。综上所述，这些样本声称，进一步提高细胞表皮核良药H2O2的灵活官能可以避免NNT抑制后Fe-S细胞频发瑕疵，从而使NNT在避免Fe-S细胞频发分解总体抑止，但对Fe-S簇的多肽无主导作用。

推论

总之，我们的研究者声称，NNT对心肌梗塞生物学具备最重要意义，主要是通过调控Fe-S细胞而促使细胞表皮核葡萄糖。与同样赞誉NNT该系统的研究者不同，我们描绘显露了NNT对NSCLC之中细胞表皮核分解羧酸亚胺稳态的微妙因素。在NSCLC之中，NNT活官能不太可能大大降低了大量分解葡萄糖招致的新陈葡萄糖亚胺。我们的找到全面性声称了细胞表皮核葡萄糖在心肌梗塞频发之中的前提，说明了细胞表皮核该系统的减慢不太可能是心肌梗塞治疗的一个最重要抗甲状腺。复合物TPH-1对胃保障起关键因素主导作用，不太可能作为治疗CKD的潜在治疗抗甲状腺。

类似显露处：

Ward NP, Kang YP, Falzone A, Boyle TA, DeNicola GM. Nicotinamide nucleotide transhydrogenase regulates mitochondrial metabolism in NSCLC through maintenance of Fe-S protein function.J Exp Med (IF: 10.892). 2020 Jun 1;217(6):e20191689. doi: 10.1084/jem.20191689.